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常见问题

液相色谱流动相的选择

作者:技术部 来源:安恒达 浏览: 发布时间:2013-04-22 14:55

1、对于一般的反相柱,用甲醇/水或乙腈/水作流动相。甲醇/水作流动相时,如果得到的色谱图出的峰分的不完全,可以加大水的比例。如果出的峰太靠后而分离效果又不错,可加大甲醇的比例,可使出峰变早。对于一些难分离的物质,要选用乙腈/水作流动相。
2、秘诀1:由强到弱: 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试 验, 这样可以很快地得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
     秘诀2:三倍规则 :每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量,保留因子约增加3倍,此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中,注意观察各个峰的分离情况。
     秘诀3:粗调转微调:当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。
3、含缓冲盐的流动相最好当天用完,不要留置过夜,用不完也要倒掉,这是为了保护好机子起见,流动相的保存期限与缓冲盐的浓度有关系,越浓越不宜保留,总之,我认为缓冲盐溶液都不宜保留超过24小时,HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
4、缓冲盐析出的状况确实很麻烦,我们现在一般都采用有机盐类替代无机盐,磷酸氢二钾代替磷酸二氢钾,不仅缓冲液配制方便,而且泵头也比较容易清洗干净,有利于保护泵头。



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