液相色谱流动相的选择
作者:技术部 来源:安恒达 浏览: 发布时间:2013-04-22 14:55
1、对于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流动相。甲醇/水作流动相时，如果得到的色谱图出的峰分的不完全，可以加大水的比例。如果出的峰太靠后而分离效果又不错，可加大甲醇的比例，可使出峰变早。对于一些难分离的物质，要选用乙腈/水作流动相。
2、秘诀1:由强到弱： 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试 验， 这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2:三倍规则 ：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3:粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
3、含缓冲盐的流动相最好当天用完，不要留置过夜，用不完也要倒掉，这是为了保护好机子起见，流动相的保存期限与缓冲盐的浓度有关系，越浓越不宜保留，总之，我认为缓冲盐溶液都不宜保留超过24小时，HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
4、缓冲盐析出的状况确实很麻烦，我们现在一般都采用有机盐类替代无机盐，磷酸氢二钾代替磷酸二氢钾，不仅缓冲液配制方便，而且泵头也比较容易清洗干净，有利于保护泵头。